ELISA酶聯(lián)**吸附，間接法測定抗體的問題

ELISA酶聯(lián)**吸附，間接法測定抗體，為何不能直接將待測抗體直接用酶標(biāo)記，然后直接加底物。而要加酶標(biāo)抗抗體。

1：待測抗體一般是**后產(chǎn)生的抗體，其中有**失敗和抗體過少等因素存在，用酶標(biāo)記有許多不確定性，如用酶標(biāo)記前期有測不出效價的可能，造成不必要的困惑。
2：ELISA酶聯(lián)**中酶標(biāo)抗抗體和抗體結(jié)合后有巨大的信號放大作用，可以將信號擴(kuò)大千倍以上，適合于較低抗體量的測定。
3：篩出單抗后可以考慮直接酶標(biāo)抗體，不過在確定測定體系上要費(fèi)不少功夫。

如果將酶標(biāo)記到待測抗體上，相對經(jīng)典的間接法更加繁瑣，而且你在 摸索標(biāo)記條件時不能保證操作失誤導(dǎo)致待測抗體失活；酶標(biāo)二抗現(xiàn)在是已經(jīng)商品化了的，被大規(guī)模生產(chǎn)，購買后使用方便。如果你的間接做的好的話，方法被優(yōu)化了后，一抗二抗顯色，總共的時間加起來，出結(jié)果不會超過2-3小時。
其實(shí)你的意思就是減少反應(yīng)步驟，節(jié)約反應(yīng)時間?？梢杂弥苯覧LISA法，就是用抗體包板，在抗原上標(biāo)記酶，然后顯色，這樣與間接法相比就減少了一步，縮短了時間。
但是，直接法和間接法，他們各有優(yōu)缺點(diǎn)，要根據(jù)你的具體要求而定了。