DKW超敏ELISA---酪胺信號放大技術(shù)

超敏ELISA產(chǎn)品通訊：
酪胺信號放大技術(shù)在ELISA方面的應(yīng)用

――達(dá)科為ELISA超敏試劑盒
酪胺信號放大技術(shù)（tyramide signal amplification,TSA）是上世紀(jì)90年代在傳統(tǒng)酶促放大理論基礎(chǔ)上發(fā)展起來一種新的信號放大技術(shù)。其基本原理如下：在過氧化氫存在時，一些酶如辣根過氧化物酶，堿性磷酸酶等可以催化一種酪胺的底物為一種非?；钴S的短壽命中間體；在短時間內(nèi)，中間體可以共價結(jié)合到周圍蛋白的富電子表面形成酪胺化復(fù)合物，大量富集成以酶為中心的類似“島”或者“樹”狀的聚集團(tuán)（如圖）；可以在酪胺上標(biāo)記熒光或者其它標(biāo)記物如生物素用于檢測。

      酪胺信號放大技術(shù)不是檢測技術(shù)，只是放大系統(tǒng)，它可以提高ELISA、IHC和ISH等的靈敏度10-100倍。另外，TSA作為擴大信號其理論本身不會增加非特異性信號，而不是像原位PCR那樣擴增檢測目標(biāo)，所以不會造成檢測偏差和假陽性。
      但是，若靶標(biāo)本底生物素水平較高或者抗體交叉反應(yīng)比較高，同樣實驗背景會成倍地放大。TSA導(dǎo)致新問題需要采用產(chǎn)生更低背景的實驗材料或方法，來降低檢測技術(shù)的非特異性背景，為TSA放大系統(tǒng)提供足夠的空間。如在分子雜交中使用DNP標(biāo)記的TSA Plus，由于DNP是生物體內(nèi)罕見的分子，檢測背景很低，性噪比就高。
      TSA應(yīng)用范圍廣泛，ELISA, **組化（IHC），原位雜交（ISH），芯片檢測和其它任何使用HRP或AP的檢測方法中都可以應(yīng)用，它的放大效應(yīng)可以使ELISA雙抗體夾心法檢測樣品濃度從皮克級（10－12）別提高到飛克級別（10－15）。
      TSA應(yīng)用在傳統(tǒng)ELISA上開發(fā)出超敏ELISA，這使檢測人體內(nèi)飛克級別的細(xì)胞因子成為可能，有利地促進(jìn)科學(xué)深入研究人體內(nèi)微量蛋白的作用。超敏ELISA還可以間接節(jié)省客戶研究所用的寶貴樣品，客戶在有限的樣本中檢測更多蛋白指標(biāo)。
     基于TSA技術(shù)開發(fā)的ELISA超敏試劑盒，其TSA放大步驟如下:
     1.在傳統(tǒng)ELISA基礎(chǔ)上，HRP結(jié)合到微孔板后，再加入放大物質(zhì)A（ biotinyl-tyramide ,B-T）到孔內(nèi)，孵育20分鐘。
     2.洗滌4次。
     3.加入streptavidin-HRP(SA-HRP)，結(jié)合 B-T。孵育20min。
     4.洗滌4次。
     5.加入TMB顯色10-15分鐘，中止反應(yīng)，在450nm波長讀數(shù)。
     以人IL-6 ELISA產(chǎn)品為例，超敏試劑盒與普通試劑盒實驗對比圖表如下：