高純度質粒中量快速提取試劑盒(離心柱型)產品介紹
本試劑盒采用改進SDS-堿裂解法裂解細胞,離心吸附柱內的硅基質膜在高鹽、低pH值狀態(tài)下選擇性地結合溶液中的質粒DNA,再通過去蛋白液和漂洗液將雜質和其它**成分去除,*后低鹽、高pH的洗脫緩沖液將純凈質粒DNA從硅基質膜上洗脫。
產品特點
1. 離心吸附柱內硅基質膜全部采用進口世界有名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復性好??朔藝a試劑盒膜質量不穩(wěn)定
的弊端。
高純度質粒中量快速提取試劑盒(離心柱型) 2. 不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑,也不需要乙醇沉淀??焖?、方便,從50ml大腸桿菌LB((Luria-Bertani)培養(yǎng)液中,可快速提取0.2-
0.5mg純凈的高拷貝質粒DNA,提取率達80%左右。
3. 獲得的質粒產量高、超螺旋比例高、純度好,可以直接用于酶切、轉化、PCR、體外轉錄、測序等各種分子生物學實驗。
產品儲存
本產品收到后按照說明書指示溫度存放各成份,儲存18個月不影響使用效果。
高純度質粒中量快速提取試劑盒(離心柱型)自備試劑
無水乙醇
注意事項
1. 所有的離心步驟如未加另外說明均在室溫完成,使用轉速可以達到至少6,000xg,帶50ml轉頭的臺式離心機。
2. 溶液P3和去蛋白液PD中含有刺激性化合物,操作時要戴乳膠手套,避免沾染皮膚、眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時,要用大量清水或者生
理鹽水沖洗。
3. 提取質粒的量與**培養(yǎng)濃度、質??截悢?shù)等因素有關。如果所提質粒為低拷貝質粒或大于10kb的大質粒,應加大菌體使用量,同時按比例
增加P1、P2、P3的用量,洗脫緩沖液應在70℃預熱。可以適當?shù)难娱L吸附和洗脫的時間,提高提取效率。
4. 得到的質粒DNA可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。OD260值為1相當于大約50μg/ml DNA。電泳可能為單一條帶,也可高純度質粒中量快速提取試劑盒(離心柱型)
能為2條或者多條DNA條帶,這主要是不同程度的超螺旋構象質粒泳動位置不一造成,與提取物培養(yǎng)時間長短、提取時操作劇烈程度等有關。
本公司產品正常操作情況下基本超螺旋可以超過90%。
5. 質粒DNA確切分子大小,必須酶切線性化后,對比DNA分子量Marker才可以知道。處于環(huán)狀或者超螺旋狀態(tài)的質粒,泳動位置不確定,無法通
過電泳知道其確切大小。
6. 洗脫液EB不含有螯合劑EDTA,不影響下游酶切、連接等反應。也可以使用水洗脫,但應該確保pH大于7.5,pH過低影響洗脫效率。用水
洗脫,質粒應該保存-20℃。質粒DNA如果需要長期保存,可以用TE緩沖液洗脫 (10mMTris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是EDTA可能影響
下游酶切反應,使用時可以適當稀釋。