無內(nèi)**高純質(zhì)粒中量提取試劑盒(離心柱型)產(chǎn)品介紹
本試劑盒采用改進SDS-堿裂解法裂解細胞,粗提物通過獨特的過濾柱選擇性結(jié)合離心除去內(nèi)**,然后離心吸附柱內(nèi)的硅基質(zhì)膜在高鹽、低pH值狀態(tài)下選擇性地結(jié)合溶液中的質(zhì)粒DNA,再通過去蛋白液和漂洗液將雜質(zhì)和其它**成分去除,*后低鹽、高pH值的洗脫緩沖液將純凈質(zhì)粒DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。
無內(nèi)**高純質(zhì)粒中量提取試劑盒(離心柱型)產(chǎn)品特點
1. 不需要使用有毒的苯酚,氯仿等試劑,也不需要乙醇沉淀??焖?,方便,從50ml大腸桿菌LB(Luria-Bertani)培養(yǎng)液中,可快速提取0.2~
0.4mg純凈的高拷貝質(zhì)粒DNA,提取率達80~90﹪。
2. 獲得的質(zhì)粒產(chǎn)量高,超螺旋比例高,純度好,可直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、PCR、體外轉(zhuǎn)錄、測序、轉(zhuǎn)染等各種分子生物學(xué)實驗。
產(chǎn)品儲存
本產(chǎn)品收到后按照說明書指示溫度存放各成份,儲存18個月不影響使用效果。
無內(nèi)**高純質(zhì)粒中量提取試劑盒(離心柱型)自備試劑
無水乙醇
注意事項
1. 提取的質(zhì)粒量與**培養(yǎng)濃度、質(zhì)??截悢?shù)等因素有關(guān)。如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)?;虼笥?0kb的大質(zhì)粒,應(yīng)加大菌體使用量,同時按比例
增加P1、P2、P3的用量,洗脫緩沖液應(yīng)在70℃預(yù)熱。可以適當(dāng)?shù)难娱L吸附和洗脫的時間,以增加提取效率。
無內(nèi)**高純質(zhì)粒中量提取試劑盒(離心柱型) 2. 得到的質(zhì)粒DNA可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。OD260值為1相當(dāng)于大約50μg/ml DNA。電泳可能為單一條帶,也可
能為2條或者多條DNA條帶,這主要是不同程度的超螺旋構(gòu)象質(zhì)粒泳動位置不一造成,與提取物培養(yǎng)時間長短、提取時操作劇烈程度等有關(guān)。
本公司產(chǎn)品正常操作情況下基本超螺旋可以超過90%。
3. 質(zhì)粒DNA確切分子大小,必須酶切線性化后,對比DNA分子量Marker才可以知道。處于環(huán)狀或者超螺旋狀態(tài)的的質(zhì)粒,泳動位置不確定,無法
通過電泳知道其確切大小。
4. 洗脫液EB不含有螯合劑EDTA,不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫,但應(yīng)該確保pH大于7.5,pH過低影響洗脫效率。用水洗
脫,質(zhì)粒應(yīng)該保存在-20℃。質(zhì)粒DNA如果需要長期保存,可以用TE緩沖液洗脫(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是EDTA可能影響
下游酶切反應(yīng),使用時可以適當(dāng)稀釋。