大型/大量質(zhì)粒提取試劑盒(溶液型、轉(zhuǎn)染型)產(chǎn)品介紹
本試劑盒用堿裂解法從培養(yǎng)菌中提取質(zhì)粒DNA,采用獨特的溶液配方和內(nèi)****試劑,只需要幾次簡單離心去除蛋白質(zhì)、多糖、內(nèi)**、RNA等雜質(zhì),獲得高質(zhì)量的質(zhì)粒DNA。純化DNA的OD260/280通常在1.8左右,得到的質(zhì)??芍苯討?yīng)用于細胞轉(zhuǎn)染甚至動物體內(nèi)實驗等對DNA純度要求很高的工作中。純化后期過程均在Eppendorf管中操作,方法簡單,不需特殊設(shè)備,無需過柱,不用酚氯仿抽提;基本可完全回收**裂解釋放出的質(zhì)粒,不必擔心質(zhì)粒DNA的丟失。本方法提取純化質(zhì)粒DNA,對質(zhì)粒損傷小,即使是10kb甚至100kb以上的大型質(zhì)?;虺笮虰AC/PAC質(zhì)粒,只要堿裂解法能夠提取,就可以有效純化。
大型/大量質(zhì)粒提取試劑盒(溶液型、轉(zhuǎn)染型)產(chǎn)品特點
1. 不需要使用有毒的苯酚,氯仿等試劑,也不需要乙醇沉淀??焖佟⒎奖?、從100-140ml大腸桿菌LB(Luria-Bertani)培養(yǎng)液中,可快速提取
0.2-0.5mg純凈的高拷貝質(zhì)粒DNA,提取率達80-90%。
2. 獲得的質(zhì)粒產(chǎn)量高,超螺旋比例高,純度好,可直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、PCR、體外轉(zhuǎn)錄、測序等各種分子生物學實驗。
3. 內(nèi)**含量極低(<10 EU/μg DNA),可直接應(yīng)用于細胞轉(zhuǎn)染。
產(chǎn)品儲存
本產(chǎn)品收到后按照說明書指示溫度存放各成份,儲存18個月不影響使用效果。
大型/大量質(zhì)粒提取試劑盒(溶液型、轉(zhuǎn)染型)自備試劑
異丙醇、70%乙醇、TE
注意事項
1. 提取的質(zhì)粒量與**培養(yǎng)濃度、質(zhì)粒拷貝數(shù)等因素有關(guān)。如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)?;虼笥?0kb的大質(zhì)粒,應(yīng)加大菌體使用量,同時按比例
增加P1、P2、P3的用量。
2. 提取大質(zhì)粒時操作動作要輕柔,應(yīng)該使用剪大了開口的吸頭,防止機械剪切對DNA的損壞。
大型/大量質(zhì)粒提取試劑盒(溶液型、轉(zhuǎn)染型) 3. DNA沉淀液沉淀離心后,可能看不到明顯沉淀。如未見沉淀,擔心DNA丟失,可保留上清液,待完成全部操作后電泳鑒定,以確定是否獲得終
產(chǎn)物(數(shù)百微克DNA離心沉淀在管的側(cè)壁上,可能無法看到明顯團塊)。
4. 得到的質(zhì)粒DNA可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。OD260值為1相當于大約50μg/ml DNA。電泳可能為單一條帶,也可
能為2條或者多條DNA條帶,這主要是不同程度的超螺旋構(gòu)象質(zhì)粒泳動位置不一造成,與提取物培養(yǎng)時間長短、提取時操作劇烈程度等有關(guān)。
本公司產(chǎn)品正常操作情況下基本超螺旋可以超過95%。
實驗圖例