2×Hieff? Long PCR Master Mix (No Dye)

產(chǎn)品描述

  2×Hieff^TM Long PCR Master Mix (No Dye)包含Long Taq DNA Polymerase，dNTP以及優(yōu)化的緩沖體系，只需加入引物和模板即可進行擴增，大大簡化實驗的操作步驟，提高了高通量操作和實驗結果的重現(xiàn)性。Long Taq DNA Polymerase是Taq DNA Polymerase與一種含有3’→5’外切酶活性（校對活性）的蛋白組成的混合酶，保真度是Taq DNA Polymerase的6倍。配合獨特的緩沖體系，Long Taq DNA Polymerase可從人基因組模板中擴增長達15 kb的片段。
Mix中不含有溴酚藍染料，其中的保護劑使得Mix 經(jīng)過反復凍融后仍可保持穩(wěn)定的活性。PCR產(chǎn)物的3’端帶A，可輕松克隆至T載體。
2×Hieff? Long PCR Master Mix (No Dye)

運輸與保存方法
冰袋（wet ice）運輸。收到產(chǎn)品后放到-20 oC保存。
質量控制
核酸外切酶殘留檢測：20 μl本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 oC下孵育1小時，DNA的電泳譜帶不發(fā)生變化。
核酸內(nèi)切酶殘留檢測：20 μl本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 oC下孵育1小時，DNA的電泳譜帶不發(fā)生變化。
大腸桿菌殘留DNA檢測: 50 μl體系中，以ddH2O為模板，擴增E.coil 16s rDNA基因。35個循環(huán)后擴增產(chǎn)物進行1% 瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，無擴增條帶。2×Hieff? Long PCR Master Mix (No Dye)
功能檢測：50 μl體系中，以100 ng人基因組DNA為模板擴增dystrophin基因。30個循環(huán)后取10% PCR產(chǎn)物進行1% 瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，觀察到單一的15 Kb條帶。

注意事項
1. 操作注意事項
由于Long Taq DNA Polymerase在室溫下也有一定的反應活性，建議在冰上配制PCR反應體系，再置于PCR儀上進行擴增。這樣有利于提高擴增的特異性，減少非特異擴增，得到良好的PCR結果。2×Hieff? Long PCR Master Mix (No Dye)
2. 引物設計注意事項
1）引物3’端*后一個堿基*好為G或者C；
2）引物3’端*后8個堿基應避免出現(xiàn)連續(xù)錯配；
3）引物3’端盡量避免發(fā)夾結構出現(xiàn)；
4）引物的Tm值調整至55℃-65℃之間。
5）引物額外附加序列，即與模板非配對序列，不應參與引物Tm值計算；
6）引物的GC含量控制在40%-60%之間；
7）正向引物和反向引物Tm值以及GC含量盡可能一致。2×Hieff? Long PCR Master Mix (No Dye)