pET44系列載體是設(shè)計用來克隆和高水平表達含有495個氨基酸的Nus標(biāo)簽的蛋白表達載體。與pET-43.1系列載體相比,pET44系列載體額外編碼一個N端的His蛋白純化標(biāo)簽。
pET42a載體的單一的多克隆位點見上面的環(huán)狀質(zhì)粒圖譜。注意:載體序列是以pBR322質(zhì)粒的編碼規(guī)矩進行編碼的,所以T7蛋白表達區(qū)在質(zhì)粒圖譜上面 是反向的。T7 RNA聚合酶啟動的克隆和表達區(qū)域在質(zhì)粒圖譜中也被標(biāo)注了出來。質(zhì)粒的F1復(fù)制子是被定向的,所以在T7噬菌體聚合酶的作用下,包含有蛋白編碼序列的病毒 粒子能夠產(chǎn)生,并啟動蛋白表達,同時蛋白表達將被T7終止子序列(Cat. No. 69337-3)的作用下終止蛋白翻譯。對pET44a載體的單鏈測序可以使用COLIDOWN primer(Cat. No. 70845-3).<
把表達的基因插入到載體的PshAI或者SmaI限制性內(nèi)切酶位點時,可以通過EK蛋白酶或者Thrombin蛋白酶將融合表達的Nus標(biāo)簽完全切除。