pET-48b載體含有N端Trx和His標(biāo)簽,在標(biāo)簽后面緊跟著的是HRV 3C蛋白酶切位點(diǎn)。HRV 3C蛋白酶能夠高特異性的識(shí)別LEVLFQ↓GP蛋白序列,能夠在低溫下高效切割掉融合標(biāo)簽序列。pET-48b載體還含有一個(gè)可選擇的C端Thrombin蛋白酶切位點(diǎn),緊接著位點(diǎn)后是S標(biāo)簽。
pET48b載體的單一的多克隆位點(diǎn)見上面的環(huán)狀質(zhì)粒圖譜。注意:載體序列是以pBR322質(zhì)粒的編碼規(guī)矩進(jìn)行編碼的,所以T7蛋白表達(dá)區(qū)在質(zhì)粒圖譜上面是反向的。
T7 RNA聚合酶啟動(dòng)的克隆和表達(dá)區(qū)域在質(zhì)粒圖譜中也被標(biāo)注了出來。質(zhì)粒的F1復(fù)制子是被定向的,所以在T7噬菌體聚合酶的作用下,包含有蛋白編碼序列的病毒 粒子能夠產(chǎn)生,并啟動(dòng)蛋白表達(dá),同時(shí)蛋白表達(dá)將被T7終止子序列(Cat. No. 69337-3)的作用下終止蛋白翻譯。
載體的單鏈測(cè)序應(yīng)該使用S 18引物(Cat. No. 71262-3)。