:原核表達(dá)載體(pCold-SUMO)是在 pCold 載體基礎(chǔ)上改造而成,該載體啟動(dòng)子(CS Promoter)來(lái)源于南極嗜冷**,在低溫下(15 度)才能啟動(dòng)蛋白的表達(dá)
。低溫下**生長(zhǎng)緩慢,使得蛋白合成速度減慢,從而*大限度的提高了蛋白正確折疊的幾率,提高了蛋白可溶性表達(dá),增強(qiáng)了活性蛋白的表達(dá)比率。該表
達(dá)系統(tǒng)所包含的 SUMO tag可以極大地提高小分子量蛋白的表達(dá)量,而且進(jìn)一步提高了蛋白的可溶表達(dá)幾率。同時(shí),試劑盒配備的SUMO Protease(含
6×His標(biāo)簽)可特異性去除 SUMO tag,從而得到不含任何標(biāo)簽的重組蛋白。TEE信號(hào)肽可增強(qiáng)冷啟動(dòng)子調(diào)控下目的蛋白的高表達(dá)。BL21(DE3)Chaprone
E.coli **中含有分子伴侶蛋白質(zhì)粒,其表達(dá)產(chǎn)物可協(xié)助重組蛋白正確折疊形成可溶活性蛋白。
分子伴侶蛋白質(zhì)粒為氯霉素抗性(chloramphenicol,Cmr)的表達(dá)受控于四環(huán)素(tetR)操縱子。