PinPoint Xa 蛋白純化系統(tǒng)用來生產(chǎn)和純化在體內(nèi)連接了生物素的融合蛋白質(zhì)。在一個(gè)載體上，將編碼需要純化蛋白質(zhì)的DNA序列克隆在載體上的一個(gè)編碼體內(nèi)添加生物素的短肽序列的下游。連接生物素的融合蛋白在大腸桿菌內(nèi)生成，然后用SoftLink軟釋放抗生物素蛋白樹脂親和純化。這個(gè)樹脂是**技術(shù)，可將蛋白質(zhì)以非變性形式洗脫出來。PinPoint載體的特點(diǎn)是含有編碼內(nèi)源蛋白酶因子Xa(發(fā)音為Ten a)的蛋白水解位點(diǎn)，使得純化標(biāo)簽可從天然蛋白上分離。載體還帶有方便得多克隆區(qū)域，便于構(gòu)建融合蛋白。
系統(tǒng)的幾個(gè)載體含有所有可能的有義讀碼框，還含有連接著生物素的樹脂、一個(gè)純化柱以及生物素，PinPoint Xa對照載體含有氯素酶轉(zhuǎn)乙?；福–AT）基因，作為監(jiān)控蛋白表達(dá)、純化和加工條件的手段。在這個(gè)系統(tǒng)中，每升培養(yǎng)物一般產(chǎn)生1-5 mg蛋白。
特點(diǎn)
● 胞內(nèi)添加生物素標(biāo)簽：用于純化融合蛋白；得到的許多蛋白質(zhì)是可溶的。
● 易于使用：可以通過柱子，也可以批量用SoftLink樹脂純化生物素標(biāo)簽蛋白質(zhì)。
● 便于檢測：鏈霉親和素堿性磷酸酶可用于檢測生物素標(biāo)簽的融合蛋白質(zhì)，以假-Western方式，監(jiān)控純化過程。
● 靈活：所有讀碼框都有相應(yīng)的PinPoint載體。
● 溫和釋放條件：SoftLink樹脂允許在非變性條件下釋放融合蛋白質(zhì)。
● tac啟動(dòng)子：可以嚴(yán)格調(diào)控表達(dá)。
應(yīng)用
● 純化毫克數(shù)量的表達(dá)蛋白。
● 生產(chǎn)新穎的生物試劑。
● 與TetraLink 樹脂同用可以制造親和柱。
