pBApo-EF1α-pur DNA是一種簡(jiǎn)單的應(yīng)用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的基因表達(dá)載體。該載體具有人多肽鏈延伸因子基因來(lái)源的啟動(dòng)子 (EF1α promoter)、單純皰疹

病毒胸苷激酶來(lái)源的polyA信號(hào)、新霉素抗性基因。通過(guò)在MCS區(qū)域插入目的基因的開(kāi)放閱讀框 (ORF)，構(gòu)建目的基因表達(dá)載體。除了通常的基因以外該載

體可以用于pri-microRNA的轉(zhuǎn)錄。此外，還可以很容易地將 (promoter＋ORF＋PolyA signal) 從這個(gè)載體上轉(zhuǎn)移到腺病毒載體上，尤其是轉(zhuǎn)移到

Adenovirus Dual Expression Kit 的組分pAxcwit上。腺病毒載體感染效率高，范圍廣，可以用于體外和體內(nèi)的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)。

使用方法
1. 插入基因
在質(zhì)粒載體的克隆位點(diǎn)處插入目的基因的開(kāi)放閱讀框（ORF）。因?yàn)檩d體上有氨芐青霉素抗性基因，可以從大腸桿菌中篩選重組體。
2. 轉(zhuǎn)染
使用 TransIT 系列、Xfect 系列（Clontech）等轉(zhuǎn)染試劑將質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)。轉(zhuǎn)染條件請(qǐng)參考轉(zhuǎn)染試劑的實(shí)驗(yàn)流程。
3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
pBApo-EF1αNeo DNA 具有新霉素抗性基因、pBApo-EF1αPur DNA 具有嘌呤霉素抗性基因，可以利用***篩選轉(zhuǎn)染細(xì)胞。
在質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后培養(yǎng) 24 小時(shí)以上，開(kāi)始使用***篩選。在細(xì)胞密度較高的情況下，可以適當(dāng)?shù)叵♂尲?xì)胞后重新培養(yǎng)。每 3～4 天更換含***的培養(yǎng)基

。通常 1～2 周可以獲得轉(zhuǎn)染細(xì)胞的克隆。由于不同細(xì)胞對(duì)***的耐藥性不同，需要研討適合的***濃度。通常 NeoR（新霉素）濃度為 500～1,000 

μg/ml，PurR（嘌呤霉素）濃度為 1～3 μg/ml。
4. 置換表達(dá)框（unit）
pBApo-EF1α系列載體經(jīng)過(guò) Cla I 或 EcoR V 酶切，將表達(dá)框（unit）（EF1a promoter+插入基因+PolyA signal）從質(zhì)粒中切出，可以輕易地轉(zhuǎn)移至其

他載體上。特別是 Adenovirus Dual Expression Kit，該載體多克隆位點(diǎn)上有 Cla I 和 Smi I 酶切位點(diǎn)，可以很輕易地將表達(dá)框轉(zhuǎn)移至腺病毒載
體上。（EcoR V 和 Smi I 都產(chǎn)生是平滑末端，適合片段與腺病毒載體連接）