載體描述:
pTet-On表達反向抑制轉(zhuǎn)錄激活因子(reverse tet-responsive transcriptional activator, rtTA),該因子來自于巨細胞病毒立即早期啟動子(immediate early promoter of cytomegalovirus, Pcmv).tTA是一段融合的1-207個氨基酸序列的Tet抑制子(TetR)和來自于單純皰疹病毒(Herpes simplex virus,HSV)的VP16蛋白帶負電荷C端激活域。
pTet-On與pTet-Off載體質(zhì)粒相似,除了4個氨基酸的不同。這4個氨基酸的差異使得TetR轉(zhuǎn)變?yōu)閞TetR,從而使得tTA轉(zhuǎn)變?yōu)閞tTA. pTet-Off還包含有幾個沉默突變。
pTet-on載體被Gossen等(1995)原本描述為pUHD17-1neo.可以通過HindIII限制性內(nèi)切酶酶切,來區(qū)分pTet-On和pTet-Off載體。
載體使用:
pTet-On載體被用來構(gòu)建穩(wěn)表達Tet-On細胞系。在將基因插入到載體的Tet抑制子元件(Tet-responsive element, TRE)控制下后,質(zhì)??梢杂糜谵D(zhuǎn)染Tet-On細胞系,rtTA可以結(jié)合TRE,從而在多西環(huán)素(DOX)的存在條件下激活基因轉(zhuǎn)錄。DOX從培養(yǎng)基中去除后,TRE調(diào)控下的基因轉(zhuǎn)錄能夠在劑量依賴的條件下下調(diào)或者關(guān)閉。更多的關(guān)于TRE原件包含載體及Tet-On細胞系的操作構(gòu)建步驟可以參見Tet 系統(tǒng)使用手冊(PT3001-1)。