pPIC9K-His載體中存在卡那抗性基因,允許利用卡那抗性在酵母體內篩選多克隆拷貝,載體其余部分與pPIC9載體完全一樣。pPIC9K-His載體能夠使用的畢赤酵母宿主菌是KM71和GS115。
pPIC9K-His載體詳細信息如下:
? pPIC9K-His載體大小9.3 bp,是融合表達載體, 含有C-His標簽,表達出來的蛋白含有C端his標簽,可以直接用于鎳柱純化。
? 載體構建過程中,可供使用的單一限制性內切酶位點為SnaB I, EcoR I, Avr II, Not I.
? 利用alpha因子分泌信號肽,分泌表達蛋白基因。
? 在載體構建過程中,你的基因必須保證與信號肽的起始密碼子的讀碼框一致。
? 畢赤酵母中利用HIS4進行篩選。
? 為了將基因插入GS115或KM71的AOX區(qū), 使用Sac I限制性內切酶線性化質粒(GS115中產生His+Mut+基因型,KM71中產生His+ MutS基因型)
?為了將基因插入GS115或KM71的His4區(qū), 使用Sal I或者Stu I限制性內切酶線性化質粒(GS115中產生His+ Mut+基因型,KM71中產生His+ MutS基因型)
?將基因插入GS115的AOX1區(qū)域,需要使用Bgl II 線性化質粒 (產生His+MutS基因型)。