pPIC3.5K是一個(gè)鑒定多拷貝基因插入到畢赤酵母基因組中的載體。
1. pPIC3.5K載體大小為9004 bp。
2. 在多克隆位點(diǎn)區(qū)域，擁有5個(gè)單一的限制性酶切位點(diǎn)：BamH I，Snab I，EcoR I，Avr II和Not I。
3.胞內(nèi)表達(dá)。
4.載體構(gòu)建時(shí)，需要包含一個(gè)ATG啟動(dòng)子，同時(shí)需要加入Kozak序列。 (Cavener and Stuart, 1991; Kozak, 1987; Kozak, 1990)
5. 畢赤酵母中使用HIS4基因篩選。
6. 將基因插入GS115和KM71的AOX1中，需要使用Sac I線性化質(zhì)粒(GS115產(chǎn)生的基因型為His+ Mut+，KM71酵母產(chǎn)生的基因型為His+ MutS)。
7. 將基因插入GS115和KM71的HIS4中，需要使用Sal I線性化質(zhì)粒(GS115產(chǎn)生的基因型為His+ Mut+，KM71酵母產(chǎn)生的基因型為His+ MutS)。
8. 將基因插入GS115的AOX1基因中，也可以使用Bgl II 限制酶線性化質(zhì)粒，產(chǎn)生的酵母基因型為His+ MutS。
