pPIC3.5酵母表達(dá)載體詳細(xì)信息如下:

1.  載體大小為7,751 bp，是非融合蛋白表達(dá)載體。

2. 單一限制性?xún)?nèi)切酶位點(diǎn)有BamH I, SnaB I, EcoR I, Avr II 和Not I.

3. 胞內(nèi)基因表達(dá)載體，不是分泌性蛋白表達(dá)載體。

4.  載體構(gòu)建時(shí)，需要包含一個(gè)ATG啟動(dòng)子，同時(shí)需要加入Kozak序列。 (Cavener and Stuart, 1991; Kozak, 1987; Kozak, 1990)

5. 畢赤酵母中使用HIS4基因篩選。

6.  將基因插入GS115和KM71的AOX1中，需要使用Sac I線(xiàn)性化質(zhì)粒(GS115產(chǎn)生的基因型為His+ Mut+，KM71酵母產(chǎn)生的基因型為His+ MutS)。

7. 將基因插入GS115和KM71的HIS4中，需要使用Sal I或 Stu I線(xiàn)性化質(zhì)粒(GS115產(chǎn)生的基因型為His+ Mut+，KM71酵母產(chǎn)生的基因型為His+ MutS)。

8. 將基因插入GS115的AOX1基因中，也可以使用Bgl II 限制酶線(xiàn)性化質(zhì)粒，產(chǎn)生的酵母基因型為His+ MutS。