pDC315載體基本信息
載體名稱: | pDC315 |
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質(zhì)粒類型: | 哺乳動物細(xì)胞腺病毒表達(dá)載體 |
高拷貝/低拷貝: | 低拷貝 |
啟動子: | MCMV |
克隆方法: | 多克隆位點(diǎn),限制性內(nèi)切酶 |
載體大小: | 3913 bp |
5' 測序引物及序列: | pDC315F: acg tgg gta taa gag gcg |
3' 測序引物及序列: | pDC315R: cga tgc tag acg atc cag |
載體標(biāo)簽: | -- |
載體抗性: | 氨芐 |
備注: | pDC315 是一種真核表達(dá)質(zhì)粒載體,將目的基因插入多克隆位點(diǎn),轉(zhuǎn)染細(xì)胞即可進(jìn)行表達(dá)。帶有目的基因的pDC315 可以通過插入位點(diǎn)兩側(cè)的酶切位點(diǎn)以及目的基因內(nèi)部的特異酶切位點(diǎn)進(jìn)行鑒定。 |
產(chǎn)品目錄號: | PD-01-27 |
穩(wěn)定性: | / |
組成型: | -- |
病毒/非病毒: | 腺病毒 |
主要元件位置:
2~102: ITR
469~991: MCMV promoter (short)
1029~1188: SV40 polyA
1190~1223: loxP
1603~1903: ori
2353~3169: amp
3454~453: Ad element
3823~1: ITR
主要酶切位點(diǎn):
Xba I:455
EcoR I:994
Nhe I:1005
BamH I:1013
Sal I:1024
Acc I:1025
pDC315 含有以下元件:
1. Ampr: 為質(zhì)粒在E.coli(如DH5α)中擴(kuò)增提供氨芐抗性(終濃度100μg/ml)。
2. ori:質(zhì)粒在E.coli 中的復(fù)制起點(diǎn)。
3. Ad:Ad 序列,主要由Ad 可以與Ad 基因組質(zhì)粒發(fā)生同源重組。
4. ITR:Ad 反向末端重復(fù)序列,是Ad 基因組的包裝識別信號。
5. MCMV:來自小鼠CMV 病毒的啟動子。
6. SV40 polyA:來自SV40 病毒T 抗原的mRNA 加尾信號。
7. loxP:真核重組酶(Cre)的重組識別序列。
通過pDC315 構(gòu)建重組腺病毒的用戶須知
1. 用戶需向Microbix Biosystems, Inc.公司購買pDC315 質(zhì)粒,并與Microbix Biosystems, Inc.公司簽訂MTA。
2. 為了確保病毒包裝的目的基因能夠正確表達(dá),用戶需對自己構(gòu)建的帶有目的基因的pDC315 進(jìn)行酶切鑒定,并建議進(jìn)行測序驗(yàn)證,保證克隆的基因正確。
3. 由于pDC315 本身是一種真核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染細(xì)胞即可介導(dǎo)目的基因的表達(dá),因此建議有條件的用戶在完成質(zhì)粒構(gòu)建后,將其轉(zhuǎn)染細(xì)胞,通過ELISA、**組化或Western 的方法來檢測目的基因的表達(dá),以及檢測目的基因表達(dá)后的生理活性。這樣可以進(jìn)一步增加實(shí)驗(yàn)成功的把握。