

主要元件位置:
2~102: ITR
469~991: MCMV promoter (short)
1029~1188: SV40 polyA
1190~1223: loxP
1603~1903: ori
2353~3169: amp
3454~453: Ad element
3823~1: ITR
主要酶切位點:
Xba I:455
EcoR I:994
Nhe I:1005
BamH I:1013
Sal I:1024
Acc I:1025
pDC315 含有以下元件:
1. Ampr: 為質(zhì)粒在E.coli(如DH5α)中擴增提供氨芐抗性(終濃度100μg/ml)。
2. ori:質(zhì)粒在E.coli 中的復(fù)制起點。
3. Ad:Ad 序列,主要由Ad 可以與Ad 基因組質(zhì)粒發(fā)生同源重組。
4. ITR:Ad 反向末端重復(fù)序列,是Ad 基因組的包裝識別信號。
5. MCMV:來自小鼠CMV 病毒的啟動子。
6. SV40 polyA:來自SV40 病毒T 抗原的mRNA 加尾信號。
7. loxP:真核重組酶(Cre)的重組識別序列。
通過pDC315 構(gòu)建重組腺病毒的用戶須知
1. 用戶需向Microbix Biosystems, Inc.公司購買pDC315 質(zhì)粒,并與Microbix Biosystems, Inc.公司簽訂MTA。
2. 為了確保病毒包裝的目的基因能夠正確表達,用戶需對自己構(gòu)建的帶有目的基因的pDC315 進行酶切鑒定,并建議進行測序驗證,保證克隆的基因正確。
3. 由于pDC315 本身是一種真核表達載體,轉(zhuǎn)染細胞即可介導(dǎo)目的基因的表達,因此建議有條件的用戶在完成質(zhì)粒構(gòu)建后,將其轉(zhuǎn)染細胞,通過ELISA、**組化或Western 的方法來檢測目的基因的表達,以及檢測目的基因表達后的生理活性。這樣可以進一步增加實驗成功的把握。