第三代慢病毒包裝質(zhì)粒系統(tǒng)包括有：Gag基因作用是編碼病毒粒子主要結(jié)構(gòu)蛋白；Pol基因作用是編碼特異性的逆轉(zhuǎn)錄酶；RRE基因作用是Rev蛋白的結(jié)合位點(diǎn)，有利于RNA的出核轉(zhuǎn)運(yùn)。pMDLG/pRRE質(zhì)粒不含有Rev基因。第三代慢病毒包裝質(zhì)粒提供了*大的生物**性，但是由于需要同時(shí)轉(zhuǎn)染四個(gè)不同的質(zhì)粒到產(chǎn)毒細(xì)胞中，在操作上也更加復(fù)雜。  常用的第三代慢病毒包裝質(zhì)粒組合是: pMDLg/pRRE + pRSV-Rev + pMD2.G.

請(qǐng)注意，大部分的Trono實(shí)驗(yàn)室慢病毒載體含有一個(gè)野生型的5' LTR 。這種類型的慢病毒載體，只能夠使用**代慢病毒包裝質(zhì)粒進(jìn)行包裝。這是由于野生型的5' LTR必須要有TAT序列，才能夠被激活。

如果你想使用第三代慢病毒包裝質(zhì)粒，你的慢病毒目的基因質(zhì)粒必須含有一個(gè)嵌合型的5' LTR片段（例如CCL-, RRL-等基因），在該片段中HIV啟動(dòng)子被CMV和RSV啟動(dòng)子取代了，所以該慢病毒質(zhì)粒，并不依賴于TAT系統(tǒng)。

含有嵌合型5' LTR的慢病毒質(zhì)粒，既能夠使用**代慢病毒包裝質(zhì)粒，也能夠使用第三代慢病毒包裝載體。