pAd/BLOCK-iT-DEST RNAi Gateway 載體 (pAd/BLOCK-iT-DEST RNAi Gateway Vector) 可用于在體內(nèi)高效導(dǎo)入和瞬時表達(dá)來自腺病毒載體的短發(fā)夾 RNA (shRNA)。 新型克隆方法將約 50 bp DNA 寡核苷酸克隆到 BLOCK-iT-U6 入門載體中緊隨 U6 polIII 啟動子之后的位置。 將入門載體高效重組到 pAd/BLOCK-iT-DEST 載體后進(jìn)行病毒制備和轉(zhuǎn)導(dǎo)，隨后 U6 啟動子驅(qū)動的 shRNA 可在大多數(shù)分裂或非分裂哺乳動物細(xì)胞類型中瞬時表達(dá)。 生成的 shRNA 可避開宿主防御機(jī)制，將有效產(chǎn)生 RNAi 基因抑制反應(yīng)。

pAd/BLOCK-iT-DEST 載體（圖 1）提供：

? attR 位點環(huán)繞的無啟動子區(qū)域，用于與側(cè)翼序列為 attL 的包含RNAi 表達(dá)盒的 U6 Gateway入門載體或任何側(cè)翼具有 attL 的啟動子和基因序列進(jìn)行高效重組

? 高效包裝腺病毒和導(dǎo)入目的 shRNA 所需的所有組分。 使用這種載體，可對分裂和非分裂哺乳動物細(xì)胞以及動物模型中的基因抑制進(jìn)行瞬時分析。