1.簡(jiǎn)介
革蘭氏陽(yáng)性菌因其在農(nóng)業(yè)，醫(yī)療和食品生物技術(shù)和重組蛋白生產(chǎn)等方面的貢獻(xiàn)而廣為人知。在所有革蘭氏陽(yáng)性菌中，枯草芽孢桿菌載體因下列原因尤為引人矚目。（一）無(wú)致病性，且一般認(rèn)為**的有機(jī)體；（二）無(wú)明顯的密碼子偏好性；（三）可直接將功能性胞外蛋白分泌到培養(yǎng)基中（目前，大約60％的市售酶由芽孢桿菌生產(chǎn)）；（四）具備包含轉(zhuǎn)錄，翻譯，蛋白質(zhì)折疊、分泌機(jī)制，遺傳操作和大規(guī)模發(fā)酵的大信息量機(jī)體。

但是下述兩個(gè)障礙減少了枯草芽孢桿菌的使用：（一）產(chǎn)生一定數(shù)目的識(shí)別并降解外源蛋白的胞外蛋白酶；（二）載體質(zhì)粒穩(wěn)定性。**個(gè)障礙已因蛋白酶缺失株的構(gòu)建而基本解決 。**個(gè)因引入使用θ-復(fù)制模式質(zhì)粒被完全克服，如由天然質(zhì)粒pAMβ1和pBS72衍生的一些質(zhì)粒（Jannière等，1990；Titok等，2003）。

*近，基于大腸桿菌 - 枯草桿菌穿梭質(zhì)粒pMTLBS72的四種不同表達(dá)載體的構(gòu)建和使用展示出**的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，業(yè)已出版（Nguyen等，2005）。

兩個(gè)新的載體pHT01和pHT43允許在細(xì)胞質(zhì)中高水平表達(dá)重組蛋白，其中pHT43載體引導(dǎo)重組蛋白到培養(yǎng)基。這兩個(gè)載體基于強(qiáng)σA-依賴(lài)性啟動(dòng)子的枯草桿菌groE操縱子通過(guò)添加lac操縱子改造成為一種高效可控的（IPTG誘導(dǎo)的）啟動(dòng)子。pHT01衍生載體可與8×His標(biāo)簽（pHT08），鏈球菌標(biāo)簽（pHT9）或C - Myc的標(biāo)簽（pHT10）相結(jié)合。

2. pHT 載體
所有在枯草芽孢桿菌的groESL操縱子之前使強(qiáng)啟動(dòng)子與lac操縱子融合的載體都可通過(guò)加入IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)。盡管當(dāng)未添加誘導(dǎo)物時(shí)表達(dá)組件的背景表達(dá)水平很低，還是成功從約1300種誘導(dǎo)因子中篩選出一種來(lái)使用bgaB報(bào)道基因（Phan等，2005）。當(dāng)分別將htpG和pbpE基因融合到groE啟動(dòng)子時(shí)，加入IPTG后，表達(dá)的重組蛋白可能分別占細(xì)胞總蛋白的10%和13%（Phan等，2005）。熱纖梭菌的amyQα-淀粉酶和纖維素酶A、B的高水平表達(dá)實(shí)驗(yàn)證實(shí)。該載體還插入了一個(gè)高效SD序列以及一個(gè)多克隆位點(diǎn)（BamH I, Xba I, Aat II, Sma I）。編碼α-淀粉酶的amyQ基因的信號(hào)肽編碼區(qū)域與pHT01的SD序列融合，構(gòu)成了pHT43，以此獲得分泌的重組蛋白。