RKO-E6【人結腸癌轉基因細胞】代數低,狀態(tài)好,發(fā)貨快,細胞庫管理規(guī)范,種類齊全,價格優(yōu)惠,在做傳代細胞培養(yǎng)之前,首先將培養(yǎng)瓶置于顯微鏡下,觀察培養(yǎng)瓶中細胞是否已長成致密單層,如已長成單層,即可進行細胞的傳代培養(yǎng)。
RKO-E6【人結腸癌轉基因細胞】描述
細胞生長:見說明書
細胞形態(tài):上皮細胞樣
細胞數量:1×106個
細胞傳代:1:3傳代,2-3天傳一代
細胞純度:92.2%
細胞活力:88.4%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
細胞檢測:細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、**、酵母和**
細胞凍存:液氮凍存(完全培養(yǎng)基+10%DMSO+20%FBS)
細胞運輸:干冰運輸(1
Vial)或活細胞運輸(T-25
flasks)
細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和**
RKO-E6【人結腸癌轉基因細胞】培養(yǎng)條件
見說明書,90%;上等胎牛血清,10%
氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%
溫度:37攝氏度
RKO-E6【人結腸癌轉基因細胞】傳代方法
顯微鏡下觀察細胞,當覆蓋80%底面積時,進行細胞傳代。注意不要等到細胞覆蓋100%的時候才傳代,那樣細胞容易老化。在生物**柜或者超凈臺中,將培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基倒到廢液缸中用PBS或者生理鹽水洗一遍加入1.5ml
0.25%含有EDTA的胰酶,在37℃培養(yǎng)箱中消化3-5分鐘后取出細胞,加入5ml培養(yǎng)基,吹打均勻后,轉移到15ml離心管中,1000rpm 離心5分鐘離心后,去掉上清,用新鮮培養(yǎng)基重懸細胞,按照1:3的比例進行細胞傳代培養(yǎng)。
RKO-E6【人結腸癌轉基因細胞】傳代密度均勻,有以下幾點比較重要:
1.盡量消化細胞分散成單細胞懸液。對于易于消化的細胞,我一般DPBS清洗一遍,加0.5ml胰酶潤洗一遍(25cm2培養(yǎng)瓶或6孔板),棄掉胰酶,37度消化2-3分鐘或室溫消化5min左右,鏡下觀察是否細胞消化較為分散。如果不夠,延長消化時間。我見過有些剛進實驗室的師弟師妹,一上來就加1-2ml胰酶,結果細胞團大片脫落,雖然有后續(xù)吹打步驟,但我覺得效果不佳。至于難消化的細胞,怎么掌握分寸,還待自己摸索或其他戰(zhàn)友分享。
2.在以上基礎上,我覺得細胞吹勻,這步比上述提到的十字移動等更為重要。如傳代1:4 ,可以收集所有細胞至離心管,加入培養(yǎng)液重懸混勻,吸管緩慢吹打20-30次,可配合水平搖晃離心管。
3.此外我覺得培養(yǎng)液的量可能也會有講究,如6孔板中你*終加入2ml細胞懸液,尤其像這樣的小面積培養(yǎng)皿,液體表面有張力,細胞易于聚集在中間,所以我一般6孔板再加1ml以消除影響,吸管緩慢吹打15-20次左右繼續(xù)混勻。
NCI-H596(人肺腺鱗癌細胞)
JEG-3(人絨毛膜癌細胞)
JAR(人胎盤絨毛癌細胞)
J82(人膀胱移行細胞癌)
IMR-32(人神經母細胞瘤細胞)
IBRS-2(豬腎細胞)
HUV-EC-C [HUVEC](人臍靜脈血管內皮細胞)
HuT 102(人T**瘤細胞)
HuH-7(人肝癌細胞)
NCI-H524(人非小細胞肺癌細胞)
HuH-6(人肝母細胞瘤細胞)
NCI-H520(人肺鱗癌細胞)
HT-29(人結腸癌細胞)
NCI-H446 [H446](人小細胞肺癌細胞)
HT-1080(人纖維肉瘤細胞)
NCI-H358(人非小細胞肺癌細胞)
NCI-H295R(人腎上腺皮質腺癌細胞)
NCI-H2452 [H2452](人間皮瘤細胞)
NCI-H23(人非小細胞肺癌細胞)
HSC-T6(大鼠肝星形細胞)
Hs-746T(人胃癌細胞)
NCI-H226 [H226](人肺鱗癌細胞)
Hs 578T(人乳腺癌細胞)
NCI-H2227(人小細胞肺癌細胞)