SF9【昆蟲卵巢細(xì)胞】代數(shù)低,狀態(tài)好,發(fā)貨快,細(xì)胞庫(kù)管理規(guī)范,種類齊全,價(jià)格優(yōu)惠,在做傳代細(xì)胞培養(yǎng)之前,首先將培養(yǎng)瓶置于顯微鏡下,觀察培養(yǎng)瓶中細(xì)胞是否已長(zhǎng)成致密單層,如已長(zhǎng)成單層,即可進(jìn)行細(xì)胞的傳代培養(yǎng)。
SF9【昆蟲卵巢細(xì)胞】描述
細(xì)胞生長(zhǎng):懸浮+貼壁
細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞數(shù)量:1×106個(gè)
細(xì)胞傳代:1:3傳代,2-3天傳一代
細(xì)胞純度:92.2%
細(xì)胞活力:88.4%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
細(xì)胞檢測(cè):細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、**、酵母和**
細(xì)胞凍存:液氮凍存(完全培養(yǎng)基+10%DMSO+20%FBS)
細(xì)胞運(yùn)輸:干冰運(yùn)輸(1
Vial)或活細(xì)胞運(yùn)輸(T-25
flasks)
細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和**
SF9【昆蟲卵巢細(xì)胞】培養(yǎng)條件
Grace's Insect medium,90%;上等胎牛血清,10%
氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%
溫度:37攝氏度
SF9【昆蟲卵巢細(xì)胞】傳代方法
顯微鏡下觀察細(xì)胞,當(dāng)覆蓋80%底面積時(shí),進(jìn)行細(xì)胞傳代。注意不要等到細(xì)胞覆蓋100%的時(shí)候才傳代,那樣細(xì)胞容易老化。在生物**柜或者超凈臺(tái)中,將培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基倒到廢液缸中用PBS或者生理鹽水洗一遍加入1.5ml
0.25%含有EDTA的胰酶,在37℃培養(yǎng)箱中消化3-5分鐘后取出細(xì)胞,加入5ml培養(yǎng)基,吹打均勻后,轉(zhuǎn)移到15ml離心管中,1000rpm 離心5分鐘離心后,去掉上清,用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,按照1:3的比例進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。
SF9【昆蟲卵巢細(xì)胞】傳代密度均勻,有以下幾點(diǎn)比較重要:
1.盡量消化細(xì)胞分散成單細(xì)胞懸液。對(duì)于易于消化的細(xì)胞,我一般DPBS清洗一遍,加0.5ml胰酶潤(rùn)洗一遍(25cm2培養(yǎng)瓶或6孔板),棄掉胰酶,37度消化2-3分鐘或室溫消化5min左右,鏡下觀察是否細(xì)胞消化較為分散。如果不夠,延長(zhǎng)消化時(shí)間。我見過有些剛進(jìn)實(shí)驗(yàn)室的師弟師妹,一上來(lái)就加1-2ml胰酶,結(jié)果細(xì)胞團(tuán)大片脫落,雖然有后續(xù)吹打步驟,但我覺得效果不佳。至于難消化的細(xì)胞,怎么掌握分寸,還待自己摸索或其他戰(zhàn)友分享。
2.在以上基礎(chǔ)上,我覺得細(xì)胞吹勻,這步比上述提到的十字移動(dòng)等更為重要。如傳代1:4 ,可以收集所有細(xì)胞至離心管,加入培養(yǎng)液重懸混勻,吸管緩慢吹打20-30次,可配合水平搖晃離心管。
3.此外我覺得培養(yǎng)液的量可能也會(huì)有講究,如6孔板中你*終加入2ml細(xì)胞懸液,尤其像這樣的小面積培養(yǎng)皿,液體表面有張力,細(xì)胞易于聚集在中間,所以我一般6孔板再加1ml以消除影響,吸管緩慢吹打15-20次左右繼續(xù)混勻。
NCI-H929細(xì)胞 人骨髓瘤細(xì)胞 1640+10%FBS+1%P/S+50uM 2-巰基乙醇 懸浮
NCTC1469細(xì)胞 小鼠正常肝細(xì)胞 DMEM +10%馬血清+1%P/S
NCTC clone 1469細(xì)胞 小鼠肝上皮細(xì)胞 DMEM +10%馬血清+1%P/S
neuro-2a細(xì)胞 小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞 MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁
NK-92細(xì)胞 人惡性非霍奇金**瘤患者的自然殺傷細(xì)胞 1640+0.2mM肌醇,0.1mM β-Me,0.02mM葉酸,100U IL-2,馬血清12.5%,上等胎牛血清,12.5%。
NIH/3T3細(xì)胞 小鼠胚胎細(xì)胞 DMEM+15%FBS+1%P/S 小牛血清培養(yǎng)不好
NR8383細(xì)胞 大鼠肺泡巨噬細(xì)胞 F12K+15%FBS+2 mM L-谷氨酰胺+ 1%P/S 懸浮和貼壁混合
NRK-52E細(xì)胞 大鼠腎細(xì)胞 DMEM+10%小牛血清+10ng/mlEGF+1%P/S 貼壁(FBS養(yǎng)不好)
OAR-L1細(xì)胞 綿羊肺成纖維細(xì)胞 DMEM+10%FBS+ 1%P/S 貼壁
OCM-1A細(xì)胞 人低侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞 1640+10%FBS+1%P/S
OCI-LY10細(xì)胞 彌漫大B細(xì)胞**瘤細(xì)胞? 1640+10%FBS+1%P/S 懸浮
OP9細(xì)胞 小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞 MEM-a(無(wú)核苷)+20%FBS + 1%P/S 貼壁