PT67【小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞】代數(shù)低，狀態(tài)好，發(fā)貨快，細(xì)胞庫管理規(guī)范，種類齊全，價格優(yōu)惠，在做傳代細(xì)胞培養(yǎng)之前，首先將培養(yǎng)瓶置于顯微鏡下，觀察培養(yǎng)瓶中細(xì)胞是否已長成致密單層，如已長成單層，即可進(jìn)行細(xì)胞的傳代培養(yǎng)。

PT67【小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞】描述

細(xì)胞生長：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

細(xì)胞數(shù)量：1×10⁶個

細(xì)胞傳代：1:3傳代,2-3天傳一代

細(xì)胞純度：92.2％

細(xì)胞活力：88.4％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

細(xì)胞檢測：細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、**、酵母和**

細(xì)胞凍存：液氮凍存（完全培養(yǎng)基+10%DMSO+20%FBS）

細(xì)胞運(yùn)輸：干冰運(yùn)輸（1 Vial）或活細(xì)胞運(yùn)輸（T-25 flasks）

細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和**

PT67【小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞】培養(yǎng)條件

DMEM,90%；上等胎牛血清，10%

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%

溫度：37攝氏度

PT67【小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞】傳代方法

顯微鏡下觀察細(xì)胞，當(dāng)覆蓋80%底面積時，進(jìn)行細(xì)胞傳代。注意不要等到細(xì)胞覆蓋100%的時候才傳代，那樣細(xì)胞容易老化。在生物**柜或者超凈臺中，將培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基倒到廢液缸中用PBS或者生理鹽水洗一遍加入1.5ml 0.25%含有EDTA的胰酶，在37℃培養(yǎng)箱中消化3-5分鐘后取出細(xì)胞，加入5ml培養(yǎng)基，吹打均勻后，轉(zhuǎn)移到15ml離心管中，1000rpm 離心5分鐘離心后，去掉上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，按照1:3的比例進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。

PT67【小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞】傳代密度均勻，有以下幾點比較重要：

1.盡量消化細(xì)胞分散成單細(xì)胞懸液。對于易于消化的細(xì)胞，我一般DPBS清洗一遍，加0.5ml胰酶潤洗一遍（25cm2培養(yǎng)瓶或6孔板），棄掉胰酶，37度消化2-3分鐘或室溫消化5min左右，鏡下觀察是否細(xì)胞消化較為分散。如果不夠，延長消化時間。我見過有些剛進(jìn)實驗室的師弟師妹，一上來就加1-2ml胰酶，結(jié)果細(xì)胞團(tuán)大片脫落，雖然有后續(xù)吹打步驟，但我覺得效果不佳。至于難消化的細(xì)胞，怎么掌握分寸，還待自己摸索或其他戰(zhàn)友分享。

2.在以上基礎(chǔ)上，我覺得細(xì)胞吹勻，這步比上述提到的十字移動等更為重要。如傳代1:4 ,可以收集所有細(xì)胞至離心管，加入培養(yǎng)液重懸混勻，吸管緩慢吹打20-30次，可配合水平搖晃離心管。

3.此外我覺得培養(yǎng)液的量可能也會有講究，如6孔板中你*終加入2ml細(xì)胞懸液，尤其像這樣的小面積培養(yǎng)皿，液體表面有張力，細(xì)胞易于聚集在中間，所以我一般6孔板再加1ml以消除影響，吸管緩慢吹打15-20次左右繼續(xù)混勻。

SMMC 7721細(xì)胞 SHZ-88（大鼠乳腺癌細(xì)胞）
SH-SY5Y（人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞）
SGC7901細(xì)胞 SHG-44 （人膠質(zhì)瘤細(xì)胞）
SGC996細(xì)胞 SGC-7901（人胃癌細(xì)胞）
Eca-109細(xì)胞 Sf9（昆蟲卵巢細(xì)胞）
SW1990細(xì)胞 Sf21（昆蟲卵巢細(xì)胞）
U251細(xì)胞 SCaBER（人膀胱鱗癌細(xì)胞）
Jurkat細(xì)胞 Saos-2（人成骨肉瘤細(xì)胞）
Bxpc-3細(xì)胞 S-180（小鼠腹水瘤細(xì)胞）
Aspc-1細(xì)胞 RWPE-1（人正常前列腺上皮細(xì)胞）
Patu 8988細(xì)胞 RSC96（大鼠雪旺細(xì)胞）
HEK 293細(xì)胞 RM-1（小鼠前列腺癌細(xì)胞）
HO8910細(xì)胞 RL95-2（人**內(nèi)膜癌細(xì)胞）
HUVEC細(xì)胞 RKO（人結(jié)腸腺癌細(xì)胞）