CHO【中國倉鼠卵巢細(xì)胞】代數(shù)低,狀態(tài)好,發(fā)貨快,細(xì)胞庫管理規(guī)范,種類齊全,價格優(yōu)惠,在做傳代細(xì)胞培養(yǎng)之前,首先將培養(yǎng)瓶置于顯微鏡下,觀察培養(yǎng)瓶中細(xì)胞是否已長成致密單層,如已長成單層,即可進(jìn)行細(xì)胞的傳代培養(yǎng)。
CHO【中國倉鼠卵巢細(xì)胞】描述
細(xì)胞生長:貼壁
細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞數(shù)量:1×106個
細(xì)胞傳代:1:3傳代,2-3天傳一代
細(xì)胞純度:92.2%
細(xì)胞活力:88.4%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
細(xì)胞檢測:細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、**、酵母和**
細(xì)胞凍存:液氮凍存(完全培養(yǎng)基+10%DMSO+20%FBS)
細(xì)胞運輸:干冰運輸(1
Vial)或活細(xì)胞運輸(T-25
flasks)
細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和**
CHO【中國倉鼠卵巢細(xì)胞】培養(yǎng)條件
DMEM,90%;上等胎牛血清,10%
氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%
溫度:37攝氏度
CHO【中國倉鼠卵巢細(xì)胞】傳代方法
顯微鏡下觀察細(xì)胞,當(dāng)覆蓋80%底面積時,進(jìn)行細(xì)胞傳代。注意不要等到細(xì)胞覆蓋100%的時候才傳代,那樣細(xì)胞容易老化。在生物**柜或者超凈臺中,將培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基倒到廢液缸中用PBS或者生理鹽水洗一遍加入1.5ml
0.25%含有EDTA的胰酶,在37℃培養(yǎng)箱中消化3-5分鐘后取出細(xì)胞,加入5ml培養(yǎng)基,吹打均勻后,轉(zhuǎn)移到15ml離心管中,1000rpm 離心5分鐘離心后,去掉上清,用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,按照1:3的比例進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。
CHO【中國倉鼠卵巢細(xì)胞】傳代密度均勻,有以下幾點比較重要:
1.盡量消化細(xì)胞分散成單細(xì)胞懸液。對于易于消化的細(xì)胞,我一般DPBS清洗一遍,加0.5ml胰酶潤洗一遍(25cm2培養(yǎng)瓶或6孔板),棄掉胰酶,37度消化2-3分鐘或室溫消化5min左右,鏡下觀察是否細(xì)胞消化較為分散。如果不夠,延長消化時間。我見過有些剛進(jìn)實驗室的師弟師妹,一上來就加1-2ml胰酶,結(jié)果細(xì)胞團(tuán)大片脫落,雖然有后續(xù)吹打步驟,但我覺得效果不佳。至于難消化的細(xì)胞,怎么掌握分寸,還待自己摸索或其他戰(zhàn)友分享。
2.在以上基礎(chǔ)上,我覺得細(xì)胞吹勻,這步比上述提到的十字移動等更為重要。如傳代1:4 ,可以收集所有細(xì)胞至離心管,加入培養(yǎng)液重懸混勻,吸管緩慢吹打20-30次,可配合水平搖晃離心管。
3.此外我覺得培養(yǎng)液的量可能也會有講究,如6孔板中你*終加入2ml細(xì)胞懸液,尤其像這樣的小面積培養(yǎng)皿,液體表面有張力,細(xì)胞易于聚集在中間,所以我一般6孔板再加1ml以消除影響,吸管緩慢吹打15-20次左右繼續(xù)混勻。
細(xì)胞名稱:HCT116(HCT-116);人結(jié)腸癌細(xì)胞
組織來源:結(jié)直腸癌
規(guī) 格:T25培養(yǎng)瓶,1×106cells
形態(tài)特征:貼壁;上皮細(xì)胞樣
生長特性:貼壁
培養(yǎng)條件:MCCOY,S 5A+10% FBS
傳代方法:1:3-1:8傳代,每周換液2次。
背景:HCT 116是1979年BRATTAIN M等從患結(jié)腸癌的男性病人中分離建立的3株惡性細(xì)胞之一;產(chǎn)生CEA、角蛋白。在半固體瓊脂糖培養(yǎng)基中形成克隆。HCT 116在無胸腺的裸鼠有致瘤性,形成上皮樣的腫瘤。
細(xì)胞簡稱:SPC-A-1(SPC-A1)細(xì)胞
細(xì)胞名稱:SPC-A-1(SPC-A1);人肺腺癌細(xì)胞
組織來源:肺
規(guī) 格:T25培養(yǎng)瓶,1×106cells
形態(tài)特征:貼壁;上皮細(xì)胞樣
生長特性:貼壁