HPF【人肺成纖維細胞】發(fā)貨時,保證細胞處于生長對數(shù)期;貼壁細胞達到75%以上匯合度,約1×106/T25細胞培養(yǎng)瓶;傳代次數(shù)4代以內(nèi);凍存細胞發(fā)2個凍存管;無微生物污染。
HPF【人肺成纖維細胞】描述
細胞生長:貼壁
細胞形態(tài):上皮細胞樣
細胞數(shù)量:1×106個
細胞傳代:1:3傳代,2-3天傳一代
細胞純度:92.2%
細胞活力:88.4%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
細胞檢測:細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、**、酵母和**
細胞凍存:液氮凍存(完全培養(yǎng)基+10%DMSO+20%FBS)
細胞運輸:干冰運輸(1 Vial)或活細胞運輸(T-25 flasks)
細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和**
HPF【人肺成纖維細胞】培養(yǎng)條件
DMEM,90%;上等胎牛血清,10%
氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%
溫度:37攝氏度
收到細胞后如何操作:
首先,觀察細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請及時與我司聯(lián)系。
用75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng),隔天再取出進行觀察。仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關(guān)信息,如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等。
可將培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管中,備用;細胞傳代時,可以將該培養(yǎng)基按照一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合使用,讓細胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。
確認細胞狀態(tài)良好后,應(yīng)及時將細胞凍存,再進行后續(xù)的實驗,避免后期實驗失誤可能發(fā)生細胞污染或死亡而導致的細胞丟失。
建議客戶收到細胞后前3天,100X、200X、400X各拍3-5張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和我司技術(shù)支持溝通交流。
預防細胞污染的注意事項:
1.實驗進行前,超凈臺用紫外燈照射30-60min,然后用75%酒精擦拭超凈臺臺面,并開啟超凈臺風機運轉(zhuǎn)5-10min再開始實驗操作。
2.實驗用品用75%酒精擦拭后才能放入超凈臺內(nèi);實驗用品用完應(yīng)移出超凈臺,以利于空氣的流通;實驗完成后用75%酒精擦拭超凈臺臺面。
3.每次操作只處理一種細胞;即使不同細胞使用相同的培養(yǎng)基也不要共享同一瓶培養(yǎng)基,避免細胞間的交叉污染。
4.操作時小心取用無菌的物品,避免污染。勿碰觸吸管尖頭,不小心碰觸后應(yīng)立即更換;不要在打開的容器瓶口正上方操作,容器打開后,傾斜45°操作,操作完成后及時蓋上瓶蓋。
5.CO2培養(yǎng)箱的清潔是較易被忽視的地方,應(yīng)1-2個月對培養(yǎng)箱定期進行清潔**。先用75%酒精擦拭培養(yǎng)箱內(nèi)壁、隔板、水盤2-3次,用雙蒸水清洗,再用酒精棉球擦拭一遍,*后紫外燈照射4h以上。水盤內(nèi)加入無菌水(應(yīng)每周更換),待培養(yǎng)箱內(nèi)溫度、濕度、CO2濃度穩(wěn)定后再放入細胞。
6.定期清洗或更換超凈臺過濾膜、預濾網(wǎng)。
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